TEREA.. 2 DE LA UNIDAD 3..

 COMO SE DESCONGELAN LOS EXPLANTES.

Las técnicas de cultivo in vitro de tejidos aparecen en lo actual como una alternativa para la conservación a corto, mediano y largo plazo.

LA CRIOCONSERVACIÓN:  es el proceso en el cual células o tejidos son congelados a muy bajas temperaturas, generalmenteentre -80 ºC y -196 ºC (el punto de ebullición del nitrógeno líquido) para disminuir las funciones vitales de una célula o un organismo y poderlo mantener en condiciones de vida suspendida por mucho tiempo. A esas temperaturas, cualquier actividad biológica, incluidas las reacciones bioquímicas que producirían la muerte de una célula, quedan efectivamente detenidas.

la crioconservación de germoplasma vegetal,    tiene algunas tecnicas como la encapsulación y deshidratación. 

a continuación e dan a conocer algunos procedimientos

  I.            Selección del material a crio conservar: Cuando se realiza la selección del material a crio conservar se debe tener la absoluta seguridad de que a partir del mismo se obtendrán plantas completas. El explante seleccionado dependerá del objetivo de conservación y está estrechamente relacionado con el tipo de propagación de la especie.

  II.            deshidratación del explante es un paso crucial para el éxito de la crio-conservación, ya que es necesario eliminar toda el agua libre presente en el tejido vegetal, minimizando así posibles daños debidos a congelación. La deshidratación del tejido puede realizarse en una cámara a 0ºC o en cámaras herméticamente cerradas utilizando sustancias higroscópicas como silica gel o glicerol (5 - 20%), o sometiendo al explante a una corriente de aire en un flujo laminar de aire estéril.

 III.         La aclimatación rápida consiste en colocar el explante directamente en nitrógeno líquido, con o sin la adición exógena de crioprotectores. La aclimatación lenta se realiza bajando gradualmente la temperatura (0.1-3ºC/min.). Este punto debe ser manejado cuidadosamente, pues una deshidratación excesiva de las células puede exponerlas a una alta concentración interna de solutos. Por esta razón, el material generalmente se congela lentamente, a una velocidad adecuada, hasta alcanzar una temperatura próxima a los -40 ºC. Luego se lleva directamente a la temperatura del nitrógeno líquido (-196 ºC).

  IV.          Descongelamiento y rehidratación: Cuando se desea recuperar el explante mantenido en nitrógeno líquido se puede realizar un descongelamiento rápido en baño de agua (generalmente 1-2 min. a 30-40 ºC) o en forma lenta, sometiendo al explante a la temperatura del laboratorio o a una corriente de aire en el flujo laminar de aire estéril.

Descongelación. Para realizar la descongelación se debe eliminar rápidamente la presencia intra y extracelular de los crioprotectores que suelen ser tóxicos a las elevadas concentraciones utilizadas. Se debe atemperar de manera correcta la muestras hasta su temperatura de cultivo.

Como regla general podemos afirmar que apróximadamente el 50% de las células que congelamos no sobrevivirán a la descongelación. Actualmente se ha logrado superar esta etapa y de la congelación se ha pasado a la vitrificación, de tal forma que con este nuevo método se consigue que no se creen cristales de hielo y sobrevivan la práctica totalidad de todas las células inmersas en el proceso.

en otra otro proseso en celulas.

Sacar el vial de células del congelador y descongelarlo a temperatura ambiente o a 37˚ C en el baño.

Poner la suspensión celular (0,5 ml) en un frasco pequeño con 5 ml de medio.

Dejar 2 h en incubador para que se peguen las células vivas y cambiar el medio para eliminar las muertas.